przychodnia zabrze tarnopolska

W tych doświadczeniach nie wykryliśmy różnic w przerośniętej odpowiedzi wzrostowej zwierząt Tg w porównaniu z myszami WT (Tabela uzupełniająca 1). Ponadto, funkcjonalne wskaźniki sprawności serca były podobne we wszystkich genotypach. Wnioskujemy, że ekspresja GFP-LC3 ograniczona do kardiomiocytów nie zmienia odpowiedzi na stres ciśnieniowy i zapewnia prawidłowy odczyt w celu śledzenia i ilościowego oznaczania aktywności autofagicznej w sercu. Wzrost zlokalizowanego autofagosomu GFP-LC3 w stresowych miocytach sercowych wskazuje na akumulację autofagosomalną (14, 20). Aby ustalić, czy było to spowodowane zwiększeniem się autofagosomu, czy też było wtórną konsekwencją dysfunkcji lizosomów zapobiegających klirensowi autofagosomu, przeprowadziliśmy immunohistochemię dla 2 markerów lizosomalnych, białka błonowego związanego z lizosomem (LAMP-1) i katepsyny D. W każdym Przypadek, stwierdziliśmy, że obfitość lizosomów była zwiększona w przypadku niewydolności serca w stosunku do kontroli przez co najmniej 2 tygodnie (Figura 2, A i B), co sugeruje, że zmniejszona funkcja lizosomalna nie przyczyniała się do akumulacji autofagosomalnej w obciążonych kardiomiocytach. Podobne wyniki uzyskano za pomocą immunoblotu (Figura 2C). Łącznie dane te są zgodne ze wzrostem strumienia przez drogi oczyszczania autofagicznego. Figura 2 Zwiększona obfitość markerów lizosomalnych w komorze sTAB. LAMP-1 (A) i katepsyna D (B), wykrywane przez immunohistochemię, zwiększają się w komorze sTAB w wielu punktach czasowych, co wskazuje na zwiększoną aktywność lizosomalną w LV obciążonych ciśnieniem. Pręty o skali: 40 m. (C) Reprezentatywny immunoblot lizatów komorowych z pozorowanej operacji i LV sTAB sondowanych dla katepsyny D. Średnie dane z 3 niezależnych eksperymentów. * P <0,05. Aktywność autofagiczna, wykrywana jako obróbka LC3 na immunoblotach lub przy użyciu TG GFP-LC3, osiągnęła pik po 48 godzinach po sTAB i pozostała znacząco podwyższona przez co najmniej 3 tygodnie (Figura 1B i Figura 3A). Biorąc pod uwagę obligatoryjną rolę beclin 1, ssaczego homologa proautofagowego genu Atg6 w drożdżach, w rekrutacji koniugatów Atg12-Atg5 do błon preautofagosomalnych (21), zmierzyliśmy poziomy białka Beclin w sercach o zwiększonej aktywności autofagicznej. Obfitość Beclina wzrosła w LV obciążonych ciśnieniem. (Figura 3B). Co ciekawe, chociaż głodzenie indukowało odpowiedź autofagiczną porównywalną w stopniu do sTAB (patrz poniżej), poziomy białka Beclin nie uległy zmianie w głodzonych sercach (Figura 3C). Ryc. 3 Przebieg czasowy aktywności autofagicznej w komorze sTAB i zmiany poziomu białka Beclin 1. (A) Aktywność autofagiczna indukowana w przegrodzie podstawowej w odpowiedzi na sTAB była określana ilościowo przez zliczanie kropek GFP-LC3 na pole mikroskopowe (14479. M2). Reprezentatywny immunoblot dla Beclin wykazał wzrost liczebności Beclin po sTAB (B), ale nie w odpowiedzi na krótkoterminowe pozbawienie składników odżywczych (C). * P <0,05 versus fikcja. Ctl, kontrola. Ostatnie badania ujawniły istotne interakcje między ścieżkami sygnalizacji autofagicznej i apoptotycznej (19, 22). Co więcej, apoptoza jest powiązana z całym procesem przebudowy mięśnia sercowego i przejściem z przerostu serca na niepowodzenie (23-25), chociaż jego znaczenie w ostrych i przewlekłych chorobach serca jest przedmiotem debaty (26). Aby zająć się potencjalnym wkładem apoptozy w przebudowę komory ciśnieniowej obciążonej ciśnieniem, zbadaliśmy komorę sTAB (48 godzin) za pomocą barwienia TUNEL i drabiny nukleosomalnego DNA. Oba podejścia ujawniły dowody apoptozy w aorcie proksymalnej do zwężenia chirurgicznego, ale nie w mięśniu sercowym (Figura 4). Łącznie odkrycia te sugerują, że apoptotyczna śmierć komórek, wyraźnie wykryta w bliższej aorcie, nie jest głównym mechanizmem przebudowy komorowej na etapie choroby (48 godzin po sTAB), który badaliśmy tutaj. Ryc. 4 Przeciążenie ciśnieniowe indukuje apoptozę w proksymalnej aorcie, ale nie w LV [przypisy: mięsak kości, łuszczyca stawowa, metatarsalgia ]