Proksymalny aktywator transkrypcji w przejściu nabłonkowo-mezenchymalnym

Przejście nabłonkowo-mezenchymalne (EMT) jest ważnym mechanizmem przemiany fenotypowej w prawidłowym rozwoju i stanach chorobowych, takich jak zwłóknienie tkanki i przerzuty. Podczas gdy konwersja nabłonka jest pod ścisłą kontrolą transkrypcyjną, znanych jest kilka kluczowych białek transkrypcyjnych. Fibroblasty wytwarzane przez EMT eksprymują gen kodujący białko specyficzne dla fibroblastów (FSP1), które jest regulowane przez proksymalny element promotora działający cis, nazywany miejscem transkrypcji fibroblastu (FTS-1). W spektrometrii mas, immunoprecypitacji chromatyny i badaniach siRNA wykorzystano FTS-1 jako unikalną sondę dla mediatorów EMT i zidentyfikowaliśmy kompleks 2 białek, czynnik wiążący CArG Boxa. A (CBF-A) i białko związane z KRAB (KAP-1), który wiąże tę stronę. Komórki nabłonkowe zaprojektowane do warunkowej ekspresji rekombinowanego CBF-A (rCBF-A) aktywują transkrypcję FSP1 i poddają się EMT. Element odpowiedzi FTS-1 występuje również w promotorach modulujących szerszy transkryptom EMT, w tym Twist i ślimak, a także kadherynę E, k-keneninę, ZO 1, wimentynę, kolagen (1) (I) i. Gładki. mięśni aktyny, a indukcja rCBF-A odpowiednio zmienia ich ekspresję. Uważamy, że tworzenie kompleksu CBF-A / KAP-1 / FTS-1 jest wystarczające do indukcji FSP1 i nowego proksymalnego aktywatora EMT. Wprowadzenie Mechanizmy regulujące sygnały molekularne dla przejścia między nabłonkowo-mezenchymalnym (EMT) są coraz bardziej złożone (1, 2). Fibrogeneza podczas gojenia się rany lub po zapaleniu narządów zależy od tworzenia i proliferacji nowych fibroblastów za pomocą EMT. Wcześniej opisywaliśmy gen kodujący białko specyficzne dla fibroblastów (FSP1), które aktywuje się w nabłonku podczas EMT i jest konstytutywnie i selektywnie obecny w nowo utworzonych fibroblastach; FSP1, znany również jako S100A4 w literaturze dotyczącej raka, jest wewnątrzkomórkowym białkiem wiążącym wapń, którego wygląd jest związany z EMT (3-7), zwłóknieniem tkanki (4, 8), chorobą naczyń płucnych (9), zwiększoną ruchliwością komórek nowotworowych i inwazyjność (10) i rozwój guza przerzutowego (11-16). FSP1 ułatwia przejście nabłonka do nowej morfologii i ruchliwości w oparciu o jego zdolność do wpływania na poziomy wewnątrzkomórkowego rozkładu wapnia i aktyny po transfekcji do hodowanych komórek. Ważną rolę FSP1 w EMT podkreślają odkrycia, które indukują EMT in vitro przez nabłonkowy czynnik wzrostu (EGF) i TGF-a. jest blokowany przez antysensowne oligomery przeciw mRNA kodującym FSP1 (6) i że poziomy mRNA kodującego E-kadherynę są odwrotnie skorelowane z ekspresją FSP1 w liniach inwazyjnych raka płaskokomórkowego (17). Kontrola transkrypcyjna EMT różnicuje specyfikację linii nabłonka podczas rozwoju (18), zaangażowanie linii nabłonka w zwłóknienie tkanki (1) i stymulację przerzutów nowotworowych (2, 11, 19). Coraz większa liczba czynników transkrypcyjnych wydaje się aktywować EMT w różnych ustawieniach, w tym Ślimak (20), Twist (11), grupa o wysokiej ruchliwości A2 (HMGA2) (21), Slug (16) i Ets-1 (22, 23) . Jednak zbiór czynników transkrypcyjnych kontrolujących EMT jest daleki od zakończenia. We wcześniejszym doniesieniu wykorzystującym konstrukty delecyjne promotora dla FSP1, zidentyfikowaliśmy nowy element działający cis w promotorze FSP1 zwany miejscem transkrypcji fibroblastu (FTSA 1), który aktywuje transfekowane reportery w fibroblastach i tworzy specyficzne kompleksy w EMSA z ekstraktami jądrowymi. (24). Stosując chromatografię powinowactwa EMSA i DNA, a następnie analizę spektrometrią masową (25), zidentyfikowaliśmy 2 kluczowe białka transkrypcyjne w tym kompleksie, a mianowicie CArg box. Czynnik wiążący. A (CBF-A) (26) i białko związane z KRAB (KAP-1) (27). Białka te tworzą trójskładnikowy kompleks z FTS-1, który angażuje transkrypcję FSP1 i odgrywa kluczową rolę funkcjonalną w tworzeniu fibroblastów przez EMT. Wyniki Oczyszczanie kompleksu wiążącego FTS-1 (3
[patrz też: lamblia objawy, leczo kalorie, łuszczyca stawowa ]